Normele din 21 iunie 2006

Anexa ──────

la norma sanitară veterinară
────────────────────────────
TEHNICA DE PRELEVARE ȘI TESTARE VIRUSOLOGICĂ
PENTRU DETECTAREA VIRUSULUI BOLII DE NEWCASTLE
1. Prelevarea de probe
1.1. Se prelevează cel puțin 60 de probe, cuprinzând minimum 30 de tampoane cloacale și 30 de tampoane traheale, de la fiecare efectiv de păsări.
1.2. Trebuie să fie prelevate probe de la cel puțin 60 de păsări.
1.3. Probele sunt prelevate cu 5 zile înainte de tăiere și se transportă pentru testare la Laboratorul Național de Referință pentru Boala de Newcastle, răcite, dar nu înghețate.
2. Manipularea probelor
2.1. Sunt grupate cel mult 5 probe de același tip.
2.2. Tampoanele trebuie să fie așezate într-o cantitate suficientă de mediu cu antibiotic, pentru a se asigura imersiunea completă, iar după agitare trebuie să fie lăsate pentru aproximativ două ore la temperatura ambiantă sau perioade mai lungi la temperatura de 4°C și apoi clarificate prin centrifugare, de exemplu, 800-1.000 x g timp de 10 minute.
3. Mediul cu antibiotic
3.1. Un exemplu tipic de tampon cloacal este: 10.000 de unități/ml penicilină, 10 mg/ml streptomicină, 0,25 mg/ml gentamicină și 5.000 de unități/ml micostatin în soluție tamponată de fosfat salin la un pH de 7,2-7,4.
3.2. Sunt adăugate 50 mg/ml de oxitetraciclină.
3.3. Concentrația de antibiotic poate să fie redusă la diluții în bază 5 pentru tampoanele traheale.
3.4. Este foarte important ca, atunci când se prepară mediul, pH-ul să fie verificat și reajustat după adăugarea de antibiotice.
4. Izolarea virusului pe ouă embrionate de pasăre
4.1. Fluidul supernatant clarificat se va inocula în cantități de câte 0,2 ml în cavitatea alantoidiană, fiecare fluid într-un număr minim de 4 ouă embrionate de pasăre ce au fost incubate timp de 8-11 zile.
4.2. Ideal este ca aceste ouă să fie obținute dintr-un lot de păsări liber de agenți patogeni, iar atunci când aceasta nu se poate practica, se acceptă folosirea ouălor obținute dintr-un lot ce se prezintă a fi liber de anticorpi produși de prezența virusului bolii de Newcastle.
4.3. Ouăle inoculate sunt menținute la temperatura de 37°C și sunt supuse zilnic mirajului.
4.4. Ouăle cu embrioni morți sau pe cale de a muri și toate ouăle rămase 4 zile după inoculare trebuie să fie răcite la temperatura de 4°C, iar lichidele alantoamniotice să fie testate pentru activitatea de hemaglutinare.
5. Interpretare
5.1. Testul este evaluat negativ dacă nu este detectat niciun fel de activitate hemaglutinantă și nu este izolat niciun virus.
5.2. Când se izolează virusul bolii de Newcastle, lotul de păsări este evaluat ca un lot suspect de boală și este supus prevederilor Normei sanitare veterinare privind măsurile de profilaxie, supraveghere și combatere a bolii de Newcastle, aprobată prin
Ordinul ministrului agriculturii, alimentației și pădurilor nr. 312/2001 , publicat în Monitorul Oficial al României, Partea I, nr. 628 din 5 octombrie 2001.
5.3. Dacă virusul izolat se dovedește a fi de origine vaccinală, prelevările de probe și testările trebuie să se repete.
___________